美德声Middlebrook 7H10琼脂基础
产品概述
Middlebrook 7H10琼脂基础是一种用于分枝杆菌选择性分离与培养的固体培养基，适用于从临床标本中选择性分离分枝杆菌属细菌，特别是结核分枝杆菌，同时也用于分枝杆菌纯培养物的培养。该培养基在诊断过程中起辅助作用，需要配合附加试验才能完成诊断结果。
分枝杆菌培养用培养基历经多代演变，早期以卵黄基质配方为主，如罗氏培养基与Petragnani培养基；此后Dubos与Middlebrook开发出含油酸和白蛋白的多种配方，可保护分枝杆菌免受毒性物质影响，有助于结核杆菌生长。在此基础上，Middlebrook与Cohn对配方进行改进，开发出7H10培养基，使分枝杆菌属细菌能够更快、更丰盛地生长。
Middlebrook 7H10琼脂（配合OADC增菌液与甘油使用）用于结核分枝杆菌的分离、培养与药敏试验。已有报道显示，与常用于分枝杆菌培养的卵黄基质培养基相比，7H10培养基上生长的污染菌较少。该产品为脱水培养基形式，需在基础培养基中补充增菌液与甘油后才能获得分枝杆菌生长。
从原理上看，谷氨酸、柠檬酸钠、吡哆醇、生物素和硫酸铵提供生长因子；柠檬酸铁铵、硫酸镁、氯化钙、硫酸锌和硫酸铜为微量离子来源；磷酸盐有助于维持培养基的pH；孔雀石绿作为选择性抑制剂抑制污染微生物菌群，同时兼作pH指示剂；琼脂为凝固剂；甘油和葡萄糖为能源；氯化钠维持渗透压平衡；白蛋白保护结核杆菌免受毒性物质影响；过氧化氢酶分解培养基中可能存在的毒性过氧化物；油酸是分枝杆菌代谢机制中利用的脂肪酸。基础培养基的终pH为6.6±0.2（25°C）。
产品特点
✓ 以油酸-白蛋白配方体系为基础，白蛋白可保护结核杆菌免受毒性物质影响，支持分枝杆菌生长
✓ 含孔雀石绿作为选择性抑制剂，可抑制污染微生物菌群，同时兼作培养基的pH指示剂
✓ 含谷氨酸、柠檬酸钠、吡哆醇、生物素和硫酸铵等多种生长因子，满足分枝杆菌的营养需求
✓ 配套OADC增菌液与甘油补充液使用，基础培养基需补充后方可获得分枝杆菌生长
✓ 含柠檬酸铁铵、硫酸镁、氯化钙、硫酸锌和硫酸铜等微量离子来源，磷酸盐体系有助于维持培养基pH
✓ 与常用于分枝杆菌培养的卵黄基质培养基相比，7H10培养基上生长的污染菌较少
✓ 脱水培养基为自由流动、均匀的粉末，外观呈浅米色带绿色色调；配制后培养基呈微乳光、浅黄绿色
技术参数
✓ 产品类型：脱水培养基（琼脂基础），需配套OADC增菌液与甘油补充液使用
✓ 终pH（25°C）：6.6±0.2
✓ 基础培养基成分（每升纯化水）：L-谷氨酸0.5g、柠檬酸钠0.4g、盐酸吡哆醇0.001g、生物素0.0005g、柠檬酸铁铵0.04g、硫酸铵0.5g、磷酸氢二钠1.5g、磷酸二氢钾1.5g、硫酸镁0.025g、孔雀石绿0.00025g、琼脂15.0g、氯化钙0.0005ml、硫酸锌0.001g、硫酸铜0.001g
✓ OADC增菌液成分：油酸0.06ml、过氧化氢酶0.003g、牛白蛋白（组分V）5.0g、葡萄糖2.0g、氯化钠0.85g
✓ 甘油补充液成分：甘油5.0ml
✓ 配制比例：19.5g粉末悬浮于900ml蒸馏水或去离子水中，该水预先加入5ml甘油补充液，灭菌冷却后无菌加入100ml Middlebrook 7H10增菌液
✓ 灭菌条件：121°C高压灭菌15分钟
✓ 有效期：即用平板6个月；管装培养基1年；脱水培养基4年；增菌液2年
✓ 外观：脱水培养基自由流动、均匀，浅米色带绿色色调；配制后培养基微乳光、浅黄绿色；OADC增菌液为琥珀色液体，澄清或轻微乳光；甘油补充液稠厚无色、呈油状外观
✓ 质控菌株与预期结果：胞内分枝杆菌ATCC 13950、瘰疬分枝杆菌ATCC 19981（接种量10³-10⁴CFU，至21天，35±2°C，5-10%CO₂）生长良好；大肠埃希菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 25923、化脓性链球菌ATCC 19615（接种量10⁴-10⁶CFU）部分至全部抑制
适用场景
✓ 临床标本中分枝杆菌属细菌特别是结核分枝杆菌的选择性分离
✓ 分枝杆菌纯培养物的培养与实验室常规传代培养
✓ 结核分枝杆菌的分离、培养及药敏试验
✓ 医院检验科、疾病预防控制机构、结核病参比实验室等开展分枝杆菌培养的微生物实验室
✓ 通常污染有常居菌群的标本（需先行去污染处理）以及来自通常无菌部位标本的分枝杆菌培养
使用方法
✓ 称取19.5g粉末，悬浮于900ml蒸馏水或去离子水中，该水中预先加入5ml甘油补充液
✓ 加热煮沸至充分溶解
✓ 于121°C高压灭菌15分钟
✓ 冷却至45-50°C，无菌操作加入100ml Middlebrook 7H10增菌液（OADC），充分混匀后倾注至无菌终容器，该培养基以斜面管或平板形式制备
✓ 临床标本应尽快处理，根据标本类型和所用方法，培养前可能需要进行均质化、消化/去污染和中和等步骤，必要时对样品进行浓缩（例如离心）
✓ 将处理后的标本接种于培养基上，避光，在含5-10%二氧化碳的需氧环境中于35±2°C培养至8周
✓ 每周检查生长情况、色素产生和菌落形态，并按实验室既定程序进行鉴定试验
注意事项
✓ 琼脂基础需补充Middlebrook 7H10增菌液与甘油后才能获得分枝杆菌生长
✓ 标本应尽可能在使用抗微生物药物治疗前采集，并尽快送至实验室检查；通常污染有常居菌群的标本需先行去污染处理，以降低非分枝杆菌过度生长的可能性
✓ 培养期间应将平板和试管避光放置
✓ 本培养基作为诊断辅助使用，结果判读与菌种鉴定须依据实验室既定程序并配合附加试验完成；具体质量控制结果请参照相应批次的检验报告
美德声Middlebrook 7H10琼脂基础