美德声坚果与花生实时荧光PCR检测试剂盒
产品概述
坚果与花生多重筛查实时荧光PCR试剂盒面向食品过敏原DNA检测，产品编号PAV26M-50，包装规格为50次反应。试剂盒将多类坚果与花生靶标分为两套PCR体系，便于在实时荧光PCR平台上对食品样品中的过敏原DNA进行检测。
Set 1在FAM通道检测榛子、腰果、开心果、夏威夷果和花生，Set 2在FAM通道检测杏仁、巴西坚果、碧根果和核桃；两套体系均设置HEX通道内参IAC，用于辅助观察反应过程。该设计使一次检测流程可覆盖多类坚果与花生靶标，适合需要按体系分组开展检测的实验室。
试剂盒包含寡核苷酸混合液、GENERase预混液、阳性对照、阴性对照和稀释液等组分，配套操作流程给出整管混合与按样本数配制工作预混液两种方案。用户可根据当次样本数量选择方案，并按每孔15µL工作预混液加5µL对照或样品的比例完成加样。
参考依据
产品开发与文件编制参考ISO 16577:2016《分子生物标志物分析术语和定义》、ISO 24276:2006及相关修订、EN 15634-1《食品 分子生物学方法 检测食品过敏原 第1部分：通用考虑》、EN 15842《食品 食品过敏原检测通用考虑和方法验证》、CEN/TS 17329-1:2019《食品 定性实时荧光PCR方法验证通用指南》、CEN/TS 15568:2007《食品 转基因生物及其衍生产品检测分析方法 采样策略》、ISO 20395《生物技术 核酸靶序列定量方法性能评价要求 qPCR和dPCR》、ISO 21571《食品 转基因生物及其衍生产品检测分析方法 核酸提取》、CAC/GL 74-2010《食品中特定DNA序列和特定蛋白质检测、鉴定和定量方法性能准则与验证指南》以及US-FDA《食品、饲料、化妆品和兽药产品核酸序列分析的方法验证指南》等文件。
产品特点
✓ 采用两套实时荧光PCR体系，Set 1覆盖榛子、腰果、开心果、夏威夷果和花生，Set 2覆盖杏仁、巴西坚果、碧根果和核桃
✓ 每套体系在FAM通道检测过敏原靶标，在HEX通道检测内参IAC，便于区分靶标信号与内参信号
✓ 试剂盒提供阳性对照和阴性对照，用于辅助监控PCR反应与污染情况
✓ GENERase预混液含ROX被动参比染料，可用于需要被动参比染料的实时荧光PCR检测流程
✓ 操作方案灵活：样本量超过25次反应时可整管混合配制工作预混液，25次反应及以下可按样本数配制中间预混液和工作预混液
✓ 试剂盒组分按10%过量提供，便于按常规反应体积完成50次反应并留有余量
✓ 寡核苷酸混合液对光敏感，操作说明要求尽量避光，并在使用前短暂涡旋和离心
技术参数
✓ 产品编号：PAV26M-50
✓ 产品名称：坚果与花生多重筛查实时荧光PCR试剂盒
✓ 规格：50次反应
✓ 检测方法：实时荧光PCR
✓ 检测靶标：Set 1为榛子、腰果、开心果、夏威夷果、花生；Set 2为杏仁、巴西坚果、碧根果、核桃
✓ 荧光通道：FAM通道检测靶标；HEX通道检测内参IAC
✓ 反应体系：每孔15µL工作预混液加5µL阳性对照、阴性对照或待测样品
✓ 试剂盒组成：寡核苷酸混合液、GENERase预混液、阳性对照、阴性对照、稀释液；每套各1管
✓ 被动参比染料：GENERase预混液含ROX
✓ 适用仪器：实时荧光PCR仪；使用Bio-Rad CFX时建议白色管或白色板
使用方法
✓ 使用前将试剂恢复至室温，短暂涡旋所有试剂并离心，使管盖液体回到管底；寡核苷酸混合液对光敏感，操作时尽量避光
✓ 根据当次样本数量选择配制方案：处理超过25次反应时采用方案1，处理25次反应及以下时采用方案2
✓ 方案1：将GENERase预混液整管和稀释液整管加入寡核苷酸混合液管，轻柔涡旋并短暂离心，得到工作预混液AWM
✓ 方案2：先将稀释液整管加入寡核苷酸混合液管，轻柔涡旋并短暂离心，得到中间预混液AIM；按每反应5µL AIM加10µL GENERase预混液配制工作预混液，并按样本数额外增加1个反应体积
✓ 在每个PCR孔中分装15µL工作预混液，再加入5µL阳性对照、阴性对照或待测样品；重复数由操作者决定
✓ 按实时荧光PCR仪操作要求设置FAM和HEX通道，Set 1与Set 2分别检测对应靶标和内参IAC
✓ 反应结束后结合FAM通道靶标信号与HEX通道IAC信号判读结果；如出现异常，参照故障排除建议检查DNA提取、对照污染或阳性对照状态
适用场景
✓ 食品生产企业、检测机构和科研实验室对坚果、花生过敏原DNA开展实时荧光PCR检测
✓ 食品原料、半成品和成品的过敏原成分筛查，以及标签符合性评估中的PCR检测流程
✓ 需要同时覆盖多类坚果与花生靶标的检测项目，可按Set 1与Set 2分组安排实验
✓ 需要以内参IAC和阳性、阴性对照辅助判读的实时荧光PCR实验
✓ 食品过敏原检测方法开发、样品复核和实验室质量控制中的PCR检测环节
美德声坚果与花生实时荧光PCR检测试剂盒